С применением комплекса зимографических методов (тесты радиальной энзимодиффузии в агарозном геле и субстратный электрофорез в полиакриламидном геле) в препаратах наружной мембраны, полученных из штаммов холерного вибриона O1 и O139 серогрупп разного происхождения и эпидемической значимости, изучен спектр и активность определённого набора гидролитических ферментов, являющихся специфичными для поверхностных структур бактериальной клетки. В качестве субстратов использованы коммерческие препараты желатина, α-лецитина и протаминсульфата (специфичен для омптиновых белков, обладающих ферментативной активностью), импрегнированные в агарозный и полиакриламидный гели соответственно прописям стандартного протокола зимографического анализа. В результате исследований обнаружены гидролазы, являющиеся маркерными для наружных мембран грамотрицательных бактерий – протеазы (желатиназы) и лецитиназы, выявлены достоверные межштаммовые различия в степени их продукции у токсигенных и нетоксигенных штаммов. Установлено, что большинство исследованных препаратов наружной мембраны обладает протеазной и лецитиназной активностью. Показано, что высокой протеолитической активностью в отношении желатина и протаминсульфата отличаются препараты наружных мембран, полученные из токсигенных штаммов холерного вибриона, в то время как препараты из нетоксигенных штаммов протеолитически менее активны. Электрофоретически обнаружено наличие лецитиназ в препаратах наружных мембран, при этом установлено, что лецитиназная активность и спектр лецитиназ препаратов наружных мембран из токсигенных штаммов меньше, чем у нетоксигенных штаммов. Обнаруженные различия в активности и составе ферментов позволяют в дальнейшем провести скрининг ферментативно активных штаммов холерного вибриона с целью изучения возможностей конструирования на их основе компонентов бесклеточной вакцины против холеры.

Козлов Станислав Николаевич, научный сотрудник, Иркутский научно-исследовательский противочумный институт, Россия, 664047, г. Иркутск, ул. Трилиссера, 78, тел.: (3952) 22–01–38, e-mail: ejimei@mail.ru 

Марков Евгений Юрьевич, доктор биологических наук, старший научный сотрудник, заведующий отделом, Иркутский научно-исследовательский противочумный институт, Россия, 664047, г. Иркутск, ул. Трилиссера, 78, тел.: (3952) 22–01–38, e-mail: markov_evgenii@mail.ru 

Урбанович Людмила Яковлевна, доктор медицинских наук, старший научный сотрудник, Иркутский научно-исследовательский противочумный институт, Россия, 664047, г. Иркутск, ул. Трилиссера, 78, тел.: (3952) 22–01–38 

Николаев Валерий Борисович, кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник, Иркутский научно-исследовательский противочумный институт, Россия, 664047, г. Иркутск, ул. Трилиссера, 78, тел.: (3952) 22–01–38 e-mail: balera58.58@mail.ru

Гидролазная активность наружной мембраны Vibrio cholerae O1 и O139 серогрупп / С. Н. Козлов, Е. Ю. Марков, Л. Я. Урбанович, В. Б. Николаев // Известия Иркутского государственного университета. Серия Биология. Экология. 2018. Т. 24. С. 110–117. https://doi.org/10.26516/2073-3372.2018.24.110

Адамов А. К. Метаболический иммунитет к холере. Саратов : Изд-во Сарат. ун-та, 1982. 176 с.

Наружные мембраны холерного вибриона как потенциальный компонент химической вакцины / Е. Ю. Марков, А. Я. Урбанович, Е. П. Голубинский, А. Б. Чернов // Журн. микробиол. 1995. № 2. С. 86–89.

Получение высокоиммуногенного препарата наружных мембран Vibrio cholerae eltor / Е. Ю. Марков, Л. Я. Урбанович, Е. П. Голубинский, Э. С. Каретникова, Т. А. Иванова, В. Б. Николаев, Н. П. Завезенов, Е. Н. Субычева // Журн. инфекц. патологии. 1998. Т. 5, № 4. С. 42–48.

Характеристика иммунобиологических свойств антигенного препарата наружных мембран холерного вибриона / Л. Я. Урбанович, Е. Ю. Марков, Е. П. Голубинский, Р. С. Колесник, С. Г. Саппо, В. С. Ганин, Э. С. Каретникова, Т. А. Иванова // Биотехнология. 1996. № 6. С. 27–33.

Potempa J., Pike R. N. Corruption of innate immunity by bacterial proteases // J. Innate Immun. 2009. Vol. 1, N 2. P. 70–87. https://doi.org/10.1159/000181144.

Nelson D. C., Carbe J., Collin M. Cysteine proteinase SpeB from Streptococcus pyogenes – a potent modifier of immunologically important host and bacterial proteins // Biochem. 2011. Vol. 392, N 12. P. 1077–1088. https://doi.org/10.1515/BC.2011.208.

Heussen C., Dowdle E. B. Electrophoretic analysis of plasminogen activators in polyacrylamide gels containing sodium dodecyl sulfate and copolymerized substrates // Anal. Biochem. 1980. Vol. 102, N 1. P. 196–202. https://doi.org/10.1016/0003-2697(80)90338-3.

The OmpU outer membrane protein, a potential adherence factor of Vibrio cholerae / V. Sperandio, J. A. Girón, W. D. Silveira, J. B. Kaper // Infect. Immun. 1995. Vol. 63, N 11. P. 4433–4438.